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反應種屬	鴨
檢測范圍	0.75ng/mL-24ng/mL
物理性能	液體組分應澄清，無沉淀或絮狀物；所有組分應無包裝破損。
用途	定量檢測血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清液等樣本中鴨25羥基維生素D3(25(OH)D3)的濃度。
實驗原理	本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。在預包被抗鴨25羥基維生素D3(25(OH)D3)抗體（固相抗體）的微孔酶標板中，加入鴨25羥基維生素D3(25(OH)D3)校準品和待測樣本，再加入生物素標記抗體，經(jīng)過溫育與充分洗滌后，再加入HRP偶聯(lián)的親和素，經(jīng)過溫育與充分洗滌，去除未結合的組分，在微孔板固相表面形成固相抗體-抗原-生物素標記抗體-親和素酶的夾心復合物。加底物A和B，底物在HRP催化下，產(chǎn)生藍色產(chǎn)物，在終止液（2M硫酸）作用下，最終轉化為黃色，在酶標儀450nm波長上測定吸光度（OD值），吸光度（OD值）與待測樣品中鴨25羥基維生素D3(25(OH)D3)的濃度正相關。擬合校準品曲線，可以計算出樣本中鴨25羥基維生素D3(25(OH)D3)的濃度。
特異性	本試劑盒識別天然和重組鴨25羥基維生素D3(25(OH)D3)，與結構類似物無交叉。
重復性	板內變異系數(shù)均<10%，板間變異系數(shù)均<15%
回收率	回收率在 85%-115%之間
試驗所需自備試驗器材	1、酶標儀（450nm）2、精密移液器及一次性吸頭3、蒸餾水4、洗瓶或者自動洗板機5、37℃水浴鍋或恒溫箱6、500ml 量筒
操作程序	所有試劑和組分都先恢復到室溫，標準品、質控品和樣品，建議做復孔。1、按前面說明書描述的方法，配制好試劑盒各種組分的工作液。2、從鋁箔袋中取出所需板條，剩余的板條用自封袋密封放回冰箱。3、設置標準品孔、0 值孔、空白孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品 50μL，0 值孔加樣本稀釋液 50μL，空白孔不加，樣本孔加待測樣本 50μL。4、除空白孔外，標準品孔、0 值孔和樣本孔，加入生物素化抗體 50μL。5、用封板膜蓋住反應板，37℃水浴鍋或恒溫箱避光孵育 30min。6、揭開封板膜，棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置 20S，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復 5 次。若使用自動洗板機，請按洗板機操作程序進行洗板，添加浸泡 30s 的程序，可以提高檢測的精度。洗板結束，加底物前，要在干凈不掉屑的紙上，充分拍干反應板。7、除空白孔外，每孔加入 HRP 標記親和素 50μL。8、用封板膜蓋住反應板，37℃水浴鍋或恒溫箱避光孵育 30min。9、重復步驟 6。10、將底物 A 和 B 按 1:1 體積充分混合，所有孔中加入底物混合液 100μL。用封板膜蓋住反應板，37℃水浴鍋或恒溫箱避光孵育 15min。11、所有孔加入終止液 50μL，在酶標儀 450nm 波長上讀取各孔吸光度（OD值）
注意事項	1：如果試劑盒的組份需要再次使用，請確保上一次使用之后沒有被污染。2：酶標板單次未使用完，要謹記密封放到 2-8℃保存。
問題分析	①問題描述：標準曲線差可能原因及相應對策：1.試劑盒平衡時間不夠——不低于 2 個小時的室溫平衡2.吸取及洗滌不充分——充分的吸取及洗滌3.移液不精確——檢查和校正移液器②問題描述：精密度低可能原因及相應對策：1.洗滌不充分——按說明書要求充分洗滌和浸泡2.混勻不充分和吸取試劑不足——充分混勻和吸取試劑3.重復利用吸頭、容器和覆膜——使用加樣器要更換新的吸頭、使用新的封板模4.加樣不精確——檢查和校正移液器③問題描述：O.D值低可能原因及相應對策：1.每孔加的試劑量不精確——校正移液器，精確加入試劑2.溫育時間不正確——保證充足的溫育時間3.溫育溫度不正確——試劑要平衡至室溫并保證準確的溫育溫度4.酶標記物或底物失效——通過混合酶標記物和底物，顏色迅速顯現(xiàn)來檢查5.沒有加入終止液——按照說明書實驗操作步驟加入終止液6.超出讀數(shù)時間讀數(shù)——在說明書推薦的讀數(shù)時間內讀數(shù)④問題描述：樣本值可能原因及相應對策：1.不正確的樣本儲存方式——正確儲存樣本，使用新鮮樣本進行實驗2.不正確的樣本收集和處理方法——采取正確的樣本收集和處理方法3.待測物質在樣本中含量低——使用新鮮樣本，重復實驗
聲明	試劑盒僅供研究使用，如將其用于臨床診斷或任何其他用途，我公司將不對因此產(chǎn)生的問題負責，亦不承擔任何法律責任。