ELISA的四種檢測(cè)方法？【白介素elisa試劑盒】
點(diǎn)擊次數(shù)：1422次 發(fā)布時(shí)間：2021/5/25 11:54:17ELISA常用的四種方法
1．直接法測(cè)定抗原
將抗原吸附在載體表面；
加酶標(biāo)抗體,形成抗原-抗體復(fù)合物；
加底物.底物的降解量＝抗原量.
2．間接法測(cè)定抗體
將抗原吸附于固相載體表面；
加抗體, 形成抗原-抗體復(fù)合物；
加酶標(biāo)抗體；
加底物. 測(cè)定底物的降解量＝抗體量.
3．雙抗體夾心法測(cè)定抗原
將抗原免疫第一種動(dòng)物獲得的抗體吸附于固相表面;
加抗原,形成抗原-抗體復(fù)合物;
加抗原免疫第二種動(dòng)物獲得的抗體,形成抗體抗原抗體復(fù)合物;
加酶標(biāo)抗抗體（第二種動(dòng)物抗體的抗體）;
加底物.底物的降解量＝抗原量.
4. 競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)定抗原
將抗體吸附在固相載體表面;
（1） 加進(jìn)酶標(biāo)抗原；
（2）,（3）加進(jìn)酶標(biāo)抗原和待測(cè)抗原；
加底物.對(duì)照孔與樣品孔底物降解量的差＝未知抗原量.
三．儀器和材料
1. 聚苯乙烯微量細(xì)胞培養(yǎng)板（平板, 40, 96孔）.
2. 酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀
3. 辣根過(guò)氧化物酶羊抗兔IgG, 工作稀釋度1:1000.
4. 包被液:：0.05mol/L pH9.6碳酸緩沖液,4℃,保存, Na2CO3 0.15克, NaHCO3 0.293克,蒸餾水稀釋至100 ml.
5. 稀釋液：0.01mol/LpH7.4 PBS－－Tween－－20, ４℃,保存. NaCl 8g, KH2PO4 0.2g, Na2HPO4.12H2O 2.9g, Tween-20,0.5ml. 蒸餾水加至1000ml.
6. 洗滌液：同稀釋液
7. 封閉液：0.5%雞卵清蛋白,pH7.4 PBS.
8. 鄰苯二胺溶液（底物）：臨用前配制 0.1M 檸檬酸（2.1g/100ml）, 6.1ml 0.2M Na2HPO4.12H2O （7.163g/100ml） 6.4ml, 蒸餾水12.5ml, 鄰苯二胺10mg, 溶解后, 臨用前加30%H2O2 40 微升.
9. 終止液：2mol/LH2SO4.
四. 操縱步驟
1. 包被抗原：用包被液將抗原作適當(dāng)稀釋, 一般為1～10微克/孔,每孔加200微升,37℃溫育1小時(shí)后,4℃冰箱放置16～18小時(shí).
2. 洗滌：倒盡板孔中液體,加滿洗滌液,靜放三分鐘,反復(fù)三次,最后將反應(yīng)板顛倒在吸水紙上,使孔中洗滌液流盡.
3. 加封閉液200微升,37℃放置一小時(shí).
4. 洗滌同2.
5. 加被檢血清：用稀釋液將被檢血清作幾種稀釋,,每孔200微升.同時(shí)作稀釋液對(duì)照.37℃放置2小時(shí).
6. 洗滌同2.
7. 加辣根過(guò)氧化物酶羊抗兔IgG, 每孔200微升, 放置37℃ 1小時(shí).
8. 洗滌同2.
9. 加底物：鄰苯二胺溶液加200ml,室溫暗處10－－15分鐘.
10. 加終止液：每孔50微升.
11. 觀察結(jié)果：用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀記錄450nm讀數(shù).
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1．直接法測(cè)定抗原
將抗原吸附在載體表面；
加酶標(biāo)抗體,形成抗原-抗體復(fù)合物；
加底物.底物的降解量＝抗原量.
2．間接法測(cè)定抗體
將抗原吸附于固相載體表面；
加抗體, 形成抗原-抗體復(fù)合物；
加酶標(biāo)抗體；
加底物. 測(cè)定底物的降解量＝抗體量.
3．雙抗體夾心法測(cè)定抗原
將抗原免疫第一種動(dòng)物獲得的抗體吸附于固相表面;
加抗原,形成抗原-抗體復(fù)合物;
加抗原免疫第二種動(dòng)物獲得的抗體,形成抗體抗原抗體復(fù)合物;
加酶標(biāo)抗抗體（第二種動(dòng)物抗體的抗體）;
加底物.底物的降解量＝抗原量.
4. 競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)定抗原
將抗體吸附在固相載體表面;
（1） 加進(jìn)酶標(biāo)抗原；
（2）,（3）加進(jìn)酶標(biāo)抗原和待測(cè)抗原；
加底物.對(duì)照孔與樣品孔底物降解量的差＝未知抗原量.
三．儀器和材料
1. 聚苯乙烯微量細(xì)胞培養(yǎng)板（平板, 40, 96孔）.
2. 酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀
3. 辣根過(guò)氧化物酶羊抗兔IgG, 工作稀釋度1:1000.
4. 包被液:：0.05mol/L pH9.6碳酸緩沖液,4℃,保存, Na2CO3 0.15克, NaHCO3 0.293克,蒸餾水稀釋至100 ml.
5. 稀釋液：0.01mol/LpH7.4 PBS－－Tween－－20, ４℃,保存. NaCl 8g, KH2PO4 0.2g, Na2HPO4.12H2O 2.9g, Tween-20,0.5ml. 蒸餾水加至1000ml.
6. 洗滌液：同稀釋液
7. 封閉液：0.5%雞卵清蛋白,pH7.4 PBS.
8. 鄰苯二胺溶液（底物）：臨用前配制 0.1M 檸檬酸（2.1g/100ml）, 6.1ml 0.2M Na2HPO4.12H2O （7.163g/100ml） 6.4ml, 蒸餾水12.5ml, 鄰苯二胺10mg, 溶解后, 臨用前加30%H2O2 40 微升.
9. 終止液：2mol/LH2SO4.
四. 操縱步驟
1. 包被抗原：用包被液將抗原作適當(dāng)稀釋, 一般為1～10微克/孔,每孔加200微升,37℃溫育1小時(shí)后,4℃冰箱放置16～18小時(shí).
2. 洗滌：倒盡板孔中液體,加滿洗滌液,靜放三分鐘,反復(fù)三次,最后將反應(yīng)板顛倒在吸水紙上,使孔中洗滌液流盡.
3. 加封閉液200微升,37℃放置一小時(shí).
4. 洗滌同2.
5. 加被檢血清：用稀釋液將被檢血清作幾種稀釋,,每孔200微升.同時(shí)作稀釋液對(duì)照.37℃放置2小時(shí).
6. 洗滌同2.
7. 加辣根過(guò)氧化物酶羊抗兔IgG, 每孔200微升, 放置37℃ 1小時(shí).
8. 洗滌同2.
9. 加底物：鄰苯二胺溶液加200ml,室溫暗處10－－15分鐘.
10. 加終止液：每孔50微升.
11. 觀察結(jié)果：用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀記錄450nm讀數(shù).
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